إذاي تحضر تخفيفات من اي محلول وتحسب معامل التخفيف

How to make dilutions and calculate the dilution factor

إذاي تحضر تخفيفات من اي محلول وتحسب معامل التخفيف

The principle of making dilution of any solution:-

The number of molecules of a substance before dilution does not change after dilution. For example, if we have 100 molecules of that substance in 1 ml of distilled water and then we add another 1 ml of distilled water, the 100 molecules are all still there but only the expression is changed where we will say 50 molecules per 1 ml instead of 100 molecules per 2 ml.

Let see this in a mathematical way,dillution-factor-before

Anddillution-factor-after

CMMIB10

So, the molecular weight is constant for the same substance because the molecular weight is constant because it depends on the atoms from which the substance is formed. But, What about the weight? Is it constant? let’s think. If we weigh 10 gm of NaCl and dissolve it in one 1 ml of distilled water and then we add another 1 ml of distilled water, IS THE WEIGHT CHANGED? Of course no, because the 10 gm are still in the 2 ml of distilled water.  This means that:

no. of molesbefore dill = no. of molesafter dill

Therefore,

Analyte concbefore dill × Vbefore dill = Analyte concafter dill × Vafter dill

conc.-before

The (Analyte concafter dill ) is what you get from the test and you should multiply it by

dilution-factor

That’s it.

and of course if you need the concentration after dilution, then, the dilution factor will be:

dilution-factor-2

Note that, if you dilute a liquid sample, the Vafter dill is the total volume and equals the volume of the sample and the volume of the solvent.

شايف المعادلات اللى فوق دي … بص فيها كويس … ببساطة تركيز المادة قبل التخفيف لم يختلف بعد التخفيف ولكن اللى اختلف الحجم يعنى مثلا لنفرض ان عندك 100 جزيء من مادة معينة في 1 مللي وضفت 1 مللي كمان ماية مقطرة هيفضل برضو تركيز المادة 100 جزئ بس في 2 مللي ولكن احنا ممكن نقولها 50 جزئ في واحد مللي بعد التخفيف ولو هنتكلم حسابيا هنقول ان تركيز أي مادة = عدد المولات ÷ الحجم وعدد الولات = التركيز×الحجم بس تعالى نفكر … عدد المولات = الوزن÷الوزن الجزيئ … طبعا الوزن الجزيئ ثابت ومبيتغيرش للمادة لانه بيعتمد على تركيب المادة … طيب والوزن؟؟ تعالى نفكر كدة … افرض انت وزنت 10 جرام من المادة ودوبتهم في 1 مللي من المذيب وبعد كدة زودت 1 مللي كمان .. هل اختلف الوزن؟؟ الحقيقة لا … ال10 جرام ذي ماهما بس بدل ما كانوا في 1 مللي بقوا في 2 مللي يبقى اذن عدد المولات ثابت قبل وبعد التخفيف … يبقى اقدر أقول ان التركيز×الحجم قبل التخفيف = التركيز × الحجم بعد التخفيف … شوف المعادلات اللى فوق … طيب احنا عايزن نحسب معامل التخفيف … لو انت عايز تحسب التركيز قبل التخفيف يبقى معامل التخفيف هيكون الحجم بعد التخفيف على الحجم قبل التخفيف والعكس لو انت عايز تحسب التركيز بعد التخفيف.

بس خد بالك انك لو بتخفف عينة سايلة هيكون الحجم بعد التخفيف هو عبارة عن الحجم الكلي وبيساوي حجم العينة بالاضافة لحجم المحلول اللى استخدمته عشان تخفف بيه.

When do you need to make dilutions?

You need to make dilution and dilution factor in the following cases:-

  1. If your sample is not enough to perform all the required tests and you have no chance to get another sample. For example, if your patient is a newborn or an infant or a child and you only get a small sample and you cannot get more, you should dilute the sample.
  2. If your sample is icteric or lipemic, you need to dilute the sample 1 to 10 to avoid the errors in your results due to the serum or plasma turbidity (in the case of a lipemic sample) or due to the dark color of the bilirubin (in the case of an icteric sample).
  3. In the case of tests performed by kinetic techniques such as ALT test or AST test, f the graph is not linear or the result you get is a negative value such as – 6 not 6, this means the activity of the enzyme is higher than the detection ability of the kits. In this case, you need to dilute the sample 1 to 3 or 1 to 5.
  4. In the case of colorimetric tests, each reagent has a detection limit beyond which the reagent will give you false lower readings than the real one. For Example, in the reagent of glucose test from spinreact company, the detection limit is 500 mg/dl. Therefore, if you measure the sample and the result was 500 or more (say 520), you should dilute the sample at least 1 to 2, then multiply the result by a dilution factor. If you do this, you will find that the result may reach 600 mg/dl.
  5. In rare cases, you need to calculate a dilution factor such as when you use different volumes of sample and standard. For example, in creatinine test, you can use 100µl of standard and 50µl of the sample on the same volume of your reagent and in this case, you should multiply the result by a dilution factor. see page 2

When the sample you get is not enough for performing all the required tests, you have 3 choices

  1. Make a new standard using the small volume that you will use to test the sample. For example, in creatinine test, if you have 50µl of the sample. you can prepare a new standard by using 50 µl. In this case, you will consume more standard and also, and after measuring the small-volume sample, you should re-enter the standard using 100µl to adjust it again for the normal procedures.
  2. Calculate the dilution factor of the both standard and sample and multiply the concentration of the sample by the dilution factorRead in page 2.
  3. Take 50µl of the sample and dilute it with 100µl saline and then take 50µl from this mix and measure it as a sample. Then multiply the result by 3 where the dilution factor will be 50:150 which means 1:3.


امتى هتحتاج تعمل تخفيف في معملك …. لو العينة بتاعتك مشمكفية تعمل كل التحاليل ومشهتقدر تطلب عينة تانية ودي ممكن تحصل معاك في الاطفال حديثي الولادة او الاطفال عموما .. فلو سحبت لطفل ومعرفتش تسحب تاني هتبقى مضطر تخفف عشان تقدر تكمل باقي التحاليل. لو العينة بتاعتك lipemic او يعنى العينة اللى فيها دهون وفيها بيكون السيرم او البلازما مشبرين او متعكرين وبرضو في حالة العينة اللى فيها صفرا عالية لازم تخفف عشان تتلاشى الاخطاء اللى ممكن تحصل من عكارة العينة الlipemic او اللون الغامق بتاع العينة اللى فيها صفرا وفي الحالة دي لازم تخفف العينة 1 ل10 … برضو لو بتشتغل تحليل alt او ast ولقيت الرسم البياني مشخط مستقيم او النتيجة مشمنطقية وطلعت بالماينس يعنى مثلا لقيتها – 6 مش 6، يبقى لازم تخفف عشان في الحالة دي نشاط الانزيم بيكون عالي لدرجة انه خارج قدرة الكيتس بتاعك وبالتالي لازم تخفف عالاقل 1 ل3 او 1 ل5…. برضو في حالة التحاليل الcolorimetric  لكل تحليل بيكون ليه detection limit يعنى مثلا الكيتس بتاع تحليل السكر من شركة سبين ريأكت بيكون الdetection limit بتاعه 500 بمعنى ان الكيست يقدر يقيس بدقة تركيز السكر اللى بيكون اقل من 500 لكن من 500 لفوق مبيقدرش يقيس بدقة وبالتالي لو بتعمل سكر وطلعت النتيجة 500 او حتى 520 لازم تخفف على الاقل 1 ل2 عشان تطلع النتيجة مظبوطة وممكن تلاقيها وصلت ل600 لما تخفف وتضرب في معامل التخفيف … برضو في حالات نادرة هتحتاج تحسب معامل التخفيف لو انت استخدمت احجام مختلفة من العينة والستنادرد على نفس الحجم من الreagent… يعنى مثلا في تحليل الكرياتينين ممكن تعمل ستنادرد ب100 ميكرو وتعمل التحليل ب50 ميكرو وهنشوف اذاي ده ممكن في الفقرة الجاية.

لما العينة اللى تسحبها تكون صغيرة ومشمكفية هيكون قدامك 3 اختيارات:-

  • انك تعمل ستنادرد من اول وجديد بس باستخدام نفس الحجم الصغير اللى هتستخدمه من العينة … يعنى مثلا في تحليل الكرياتينين لو العينة كان فيها 50 ميكرو بس وهتعمل التحليل ب50 ميكرو بس يبقى هتعمل استنادرد ب50 ميكرو برضو وفي الحالة دي انت هتستهلك ستنادرد زيادة وكمان لازم ترجع تقيس الستنادرد تاني ب100 ميكرو عشان تمشى مع الكيتس بتاعتك.
  • الاختيار الثاني انك تحسب معامل التخفيف للعينة والستنادرد وتستخدمهم في اللى هنشوفها في الصفحة التانية من الموضوع ده.
  • انك تاخد مثلا 50 ميكرو من العينة وتحط عليهم 100 ميكرو سلاين يعنى تخففهم بسلاين وبعد كدة هتضرب في 3 عشان التخفيف هيكون 50 عينة:150 الحجم الكلي يعنى التخفيف هيكون 1 الى 3.

Comments

Facebook Comments