عد الدم الابيض (عد كرات الدم البيضاء((WBCs count) يدويا بالتفصيل – الطريقة فقط

عد الدم الابيض (عد كرات الدم البيضاء((WBCs count) يدويا بالتفصيل – الطريقة فقط

Here we will talk about the method only and we don’t mention the condition in which the WBCs increased or decreased but we will mention it in anther posts

هنتكلم بس عن الطريقة المانول فقط ومشهنتكلم عن تفسير النتايج لكن هنتكلم عنها ان شاء الله في موضوع صورة الدم الكاملة قريبا

The aim and the Value of test هدف التحليل او اذاى بنستفيد منه:

The number of leukocytes contained in 1 liter of blood is called the leukocyte number concentration or leukocyte count.

A white blood cell (WBC) count is used to investigate HIV/AIDS, infections and unexplained fever, and to monitor treatments which can cause leukopenia. In most situations when a total WBC count is requested it is usual to perform also a differential WBC count (coming soon).


عدد كرات الدم البيضاء فى اللتر الواحد هو اللى اسمه عد كرات الدم ولكن فالمعامل المصرية بالاخص بيكتبوا فالنتيجة التركيز مش بالليتر لكن بالميكرو…

عد كرات الدم بيشتخدم في تشخيص متابعة الامراض المتسببة في زيادة كرات الدم البيضاء ذى مثلا امراض الايدز وامراض نقص المناعة الزاتية وكذلك العدوى والحمى وممكن عشان نشوف تاثير العلاج على المرض ذى مثلا فحالة اللوكيميا اللى هى سرطان الدم …….. وفي معظم الاحيان لما يبقى مطلوب تحليل عد الدم الابيض الكلى بيبقى من المعتاد او الافضل انك تعمل كمان عد دم ابيض نوعى يعنى هتقول عدد كل نوع من انواع خلايا الدم البيضاء.

Principle of  the test فكرة العمل:

Whole blood is diluted 1 in 20 in an acid reagent which haemolyzes the red cells (not the nucleus of nucleated red cells which is called reticulocyte), leaving the white cells to be counted.

White cells are counted microscopically using an Improved Neubauer ruled counting chamber (haemocytometer) and the number of WBCs per litre of blood calculated.

Note: When after examining a stained blood film, many nucleated red cells are present (more than 10%), the WBC count should be corrected (see end of Test Method).

بنجيب  عينة دم مشمتجلطة يعنى عليها مانع تجلط ونعمل منها تخفيف 1:20 في محلول يكوان حامضى عشان يكسر كرات الدم البيضاء بس المحلول ده مشبيكسر كرات الدم الحمرا الغير ناضجة اللى فيها نواة اللى بيسموها ريتيكيولوسيت (reticulocyte) وطبعا المحلول ده يكون مبياثرش على كرات الدم البيضا.

بعد كدة هناخد مثلا 10 ميكرو من التخفيف ده ونحط منه على شريحة عد الدم اللى هي الهيموسيتومتر (hemocytometer) ونحسب بقى عدد خلايا الدم البيضا في اللتر او الميكرو طبعا على حسب نظام المعامل والمتعارف عليه بين المعامل والدكاترة في دولتك.

احنا قولنا ان الreticulocyte اللى هى خلايا دم حمرا غير ناضجة مشبتتكسر وبتتشاف على انها كرات دم بيضا ومشهتعرف تفرق بينها وبين البيضا لاننا بنعد على عدسة 10 يعنى حتى الحجم مشهيبان وبالتالى لو كان عدد الreticulocyte اكتر من الطبيعى يبقى هيطلع عدد خلايا الد البيضا اكبر من اللى مفروض يكون موجود بالتالى لازم اعمل تصحيح ودى ليها معادلة هنشوفها.

Blood sample نوع العينة المستخدمة:

EDTA anticoagulated blood or capillary blood can be used for counting white cells. Heparin or sodium citrate anticoagulated blood must not be used. The count should be performed within 6 hours (blood should not be refrigerated).

طبعا عينة دم عليها ايدتا (EDTA) كمانع تجلط او عينة من شكة صباع بس دى لازم نشتغلها بسرعة يعنى ناخد مثلا ال50 ميكرو بتوعنا ونخفف فوقتها …..مينفع نسخدم الهيبارين او الصديوم سترات (sodium citrate) كمانع تجلط …. ولازم نعمل التحليل فخلال 6 ساعات من سحب العينة. والعينة مينفعش اجمدها ولا اسقعها وبعد كدة اجيبها من التلاجة واعد.

Tools الادوات:

1) Counting chamber (hemocytometer)

The counting chamber recommended for cell counts is

–       A metallized surface (‘Bright-line’)

–       Double cell Improved Neubauer ruled chamber.

Non-metallized haemocytometers: While these are less expensive, they are not recommended because the background rulings and cells are not as easily seen which makes it is more difficult to count WBCs reliably using this type of chamber . Non-metallized chambers are also more difficult to fill.

Improved-Neubauer-ruled-counting-chamber-non-metalized2

Improved-Neubauer-ruled-counting-chamber-metalized3

—————————————————————————————————————

بيتكلم عن الهيموسيتومتر … لازم يكون metalized يعنى الغرفة تكون خلفيتها فضية كدة او بتلمع عشان تبقى خطوط غرفة العد واضحة ذى ما شايفين الصو … كمان لازم يكون الهيموسيتومتر فيه غرفتين من مشغرفة واحدة.

الهيموسيتومتر اللى ميكونش فيه خلفية غرفة العد فضية بيكون ارخص ولكن لا يرجح استخدامه عشان الخطوط بتاعة غرفة العد بتكون غير واضحة وده ممكن يخلينا نعد غلط ده غير انها بتكون صعب تحط فيها العينة.

cover glass for hemocytometer2) Counting chamber cover glasses

Special optically plane cover glasses of defined thickness (designed for use with hemocytometers) are required.

Other cover glasses must not be used.

Manufacturers of counting chambers provide two cover glasses with each chamber.

The laboratory should always keep in stock spare cover glasses.

بالنسبة للكفر الزجاج (glass cover) …. الهيموسيتومتر بيكون ليه كفر مخصوص بيه بيكون جاى مع الهيموسيتومتر وبيكون 2 واحد لكل غرفة عد ….. مينفعش استخدم اى كفر زجاج عادى ولازم اكون شايل عندى فالمخزن كفر زيادة عشان لقدر الله لو ال2 اللى جاين مع الهيموستومتر اتكسروا يبقى عندى كفر زيادة والشغل ميقفش.

220px-Pasteur_PipetsPasteur-Pipette3) Pipettes/calibrated capillaries and safe filling device

We need 3 types of Pipettes

First: Graduated Pipette of 1 ml volume to get the volume needed from the diluting fluid

Second: Pasteur pipette of a capillary pipette to mix the blood sample and with diluting fluid

Third: Calibrated pipette of 20 µl (0.02 ml, 20 cmm) to aspirate 20 µl accurately

 Sahli PipetteIn case of Calibrated Pipette:

==> You may buy a Calibrated pipette of 20 µl (0.02 ml, 20 cmm) e.g. Sahli is required to measure blood samples.

==> Of It may be supplied with hemocytometers by some manufacturers and it is called a Bulb Pipette. and there is 2 Bulb pipettes supplied; one for Red blood cell count and one for WBCs count,>>>>>>  

BUT:

  • Bulb Pipettes should not be used for counting WBCs because it is not possible to obtain reliable mixing of the blood and diluting fluid inside the bulb of the pipette.

  • Bulb pipettes are also difficult to clean and expensive to replace

A safe pipette/capillary filler should be used to aspirate and dispense the blood. This can be a simple bulb filler or device.  (CLIKC HERE TO SEE THE Pipette filter)

هنا بنتكلم عن نوع الماصة اللى هنستخدمها … اول نوع عبارة عن ماصة مدرجة من صفر الى 1 ملليلتر ودى هنستخدمها عشان ناحد بيها 1 ملليلتر من محلول التخفيف ذى ماهنشوف بعد شوية … النوع التانى عبارة عن باستير بيبت او ماصة خاصة بالانابيب الشعرية عشان نقلب العينة مشاكتر … والماصة التالتة عبارة عن ماصة بنسميها calibrated pipette يعنى ماصة حجمها ثابت ذى مثلا ماصة ساهلى دى بتبقى 20 ميكروليتر مثلا ودى عشان ناخد بيها عينة الدم  … وبرضو ضى الbulb pipette ذى اللى فالصورة الجاية ودى بتبقى عبارة عن ماصة فيها انتفاخ زجاجى كدة صغير … ودى بتبقى جاية مع الهيموستومتر وبيبقى واحدة مخصوصة لعد الدم الاحمر وواحدة مخصوصة بعد الدم الابيض وبنفرق بينهم اذاى؟؟ الماصة بتاعة عد الدم الاحمر بيبقى فيها نقطة حمرا او بنسميها خرزة حمرا والماصة بتاعة عد الدم الابيض بيبقها فيها خرة بيضا….. ولكن الbulb pipette دى بالرغم انها جاية مع الهيموسيتومتر الا انه لا يفضل اننا نستخدمها فى عد دم كرات الدم البيضا عشان عشان تقليب العينة وخلطها بمحلول التخفيف مشبيبقى بصورة جيدة وكمان صعب تنضيفها وغالية 

بس عموما فكل نوع من دول لازم نستخدم pipette filter وده عبارة عن حاجة بتخليك تسحب اى محلول او عينة الدم بس ممشبققك عشان نتجنب حدوث اى خطر على الشخص اللى بيقوم بعمل التحليل

—————————————————————————————————————

blood-diluting-pipettes-for-white-corpusclesblood-diluting-pipettes-for-red-corpuscles

————————————————————————————————————

They are differ in the volume

You can use Variable Micropipette instead of all the THREE types

 micropipettes-a-volume-variable

4) Hand counter

To count white cells accurately, a simple inexpensive mechanical hand tally counter or bead counter

Turning the knob on the side returns the counter to zero after each count.

ده مجرد عداد للخلايا بتمسكه فايدك وانت بتعد عشان متتلخبطش لو عديت بالنظر

hand-tally-counter

Bead-Score-Counter

—————————————————————————————————————

Reagent

CLICK HERE to see how you can prepared it manually in the lab

It is WBC diluting fluid

This is a weak acid solution to which gentian violet is added which stains the nucleus of white cells.

الreagent  عبارة عن محلول يستخدم فى تخفيف العينة وفنفس الوقت لصبغ العينة بالgentian violet وتكسير كرات الدم الحمرا عن طريق الacetic acid 

 See dilution step in Page 2

(0/5)0

Comments

Facebook Comments

Leave a Reply