تحليل الكرياتينين في الدم داخل المعمل|طريقة جافيه|سبين ريأكت كيت

تحليل الكرياتينين في الدم في المعمل

من دلائل وظائف الكلية

طريقة جافيه

Spinreact kit

I) Introduction

1) Names:-

Formal name: Creatinine

Also known as: Creat; Blood Creatinine; Serum Creatinine.

2) What is the ALT?

اقراها في تحليل الكرياتينين التعريف وتثقيف المريض . اضغط هنا

3) Why it is required?

اقراها في تحليل الكرياتينين التعريف وتثقيف المريض . اضغط هنا

4) When should you get tested?

اقراها في تحليل الكرياتينين التعريف وتثقيف المريض . اضغط هنا

5) What are the needed preparations before the test?

اقراها في تحليل الكرياتينين التعريف وتثقيف المريض . اضغط هنا

II) Required sample:-

1) Sample type:-

اقراها في تحليل الكرياتينين في المعمل – طريقة جافية – الفكرة العامة . اضغط هنا

2) Sample collection method:-

اقراها في تحليل الكرياتينين في المعمل – طريقة جافية – الفكرة العامة . اضغط هنا

3) Criteria for sample rejection:-

اقراها في تحليل الكرياتينين في المعمل – طريقة جافية – الفكرة العامة . اضغط هنا

III) The Test:-

ِColorimetric-Kinetic technique (IFCC METHOD)

By Spinreact kits

1) Principle

اقراها في تحليل الكرياتينين في المعمل – طريقة جافية – الفكرة العامة . اضغط هنا

2) Devices used:-

اقراها في تحليل الكرياتينين في المعمل – طريقة جافية – الفكرة العامة . اضغط هنا

3) Reagents:-

Kits of Creatinine from Spinreact Company with reference code 1001110, 1001111, 1001112, 1001113.

  • Composition:-
    • Reagent 1 (R1) (color reagent): picric acid 17.5 mol/l.
    • Reagent 2 (R2) (alkaline sol.):  sodium hydroxide 0.29 mmol/l.
    • Standard: Creatinine 2mg/l (177 µmol/l).
  • STORAGE
    • Store at 2-8oC
    • Reagents and standards are stable until the expiry date shown on the label when stored tightly closed, protected from light and contaminations prevented during their use.
  • Indications of deterioration:
    • Reagents:- presence of particles, turbidity and absorbance of the blank over ≥1.80 at 452-510 nm (1 cm cuvette).
    • Standard solution:– Presence of particles and turbidity.
  • Reagent preparation
    • Standard (S):- ready to use
    • Working Reagent: Mix equal volumes of R1 and R2. Mix gently (you can prepare the WS for each, so, you need to mix only 500µl R1 with 500µl R2 because the cuvette needs 1 ml to be filled).
      • Stable for one month at 2-8ºC.

بالنسبة للكيتس … عبارة عنR1  وده اكيد الColoring reagent عشان يتفاعل مع الكرياتينين ويدينا المادة الملونة وهنا حمض البكريك هو الcoloring reagent بتركيز 25 مللي مول لكل لتر وعندنا كمان R2 فيها المحلول القلوي وهو هيدروكسيد الصوديم NaOH بتركيز 0.4 مول لكل لتر… وعندنا المحلول القياسي اللى هو الكرياتينين نفسه بتركيز 2 مللي جرام لكل ديسي لتر او 177 ميكرومول لكل لتر.

الكيتس بيتخزن عند درجة حرارة من 2 ل8 يعنى في درجة حرارة الغرفة والكيتس بتبقى ثابتة لحد تاريخ انتهاء الصلاحية طالما متخزنة مقفولة كويس وطبعا لو حفظتها برضو من التلوث وتعرف ان الكيتس بقى مينفعش تشتغل بيه لما تلاقي تعكير وان الabsorbance للبلانك عند طول موجي من 452 ل 500 نانومتر اعلى من 1.80 والstandard تعرف انه ملوث لما تلاقي فيه تعكير او حبيبات.

بالنسبة لتحضير الكيتس … الstandard جاهزمشمحتاج أي خطوات تحضيرية ولكن الreagent محتاج تحضير … هنخلط كميات متساوية من R1 و R2 وبكدة يكون معاك الworking solution بس خد بالك ان المحلول ده بعد الخلط بيتحفظ في التلاجة عن درجة حرارة من2 ل8 وبيكون صالح لمدة 15 يوم و7 أيام في درجة حرارة الغرفة وممكن متحضرش لكن ممكن تحضره وقت التجربة في الكيوفيت علطول وعشان الكيوفيت محتاجة واحد مللي بس عشان تتمللي يبقى هتحتاج تخلط 500 ميكرو من R1 مع 500 ميكرو R2


4) Procedure:-

Note:- these procedures are for spectrophotometer users, not for semi-automated users

  • Clean the cuvettes if you use a spectrophotometer or semi-automated analyzer without suction system or flush the aspiration system of your semi-automated analyzer if it is with a suction system by keeping the tubing in a distilled water for 2 minutes.
  • prepare the working solution as instructed by the Biosystems reagent by Mixing equal volumes of the alkaline solution (R1) and the coloring reagent (R2). The cuvette is filled with 1 ml, so, the equal volumes usually are 500µl RA with 500µl RB for each tube or cuvette.
  • Bring 3 clean tubes and add the following:
  Blank Sample Standard

working solution (ml)

1.0 1.0 1.0
  • Zero the instrument with the working solution blank at 500nm (because the reagent is not colorless)
  • Incubate at 37oC for 2-5 minutes to bring it to 37oC
  • Then add the serum and standard as follow:-
  Blank Sample Standard
working solution (ml) 1.0 1.0 1.0
Sample (ml) 0.1 (100µ)
Standard (ml) 0.1 (100µ)
  • Start the stopwatch or timer immediately after adding the standard and sample then continue incubation at 37oC.
  • Read the absorbance at 500nm after 30 seconds (A1), then wait up to 90 seconds (A2) and find the concentration (see the calculations).


اول حاجة طبعا انت بتغسل الكيوفيت والانابيب كويس او بتشطف نظام الشفط في الجهاز النصف اوتوماتك عن طريق انك بتخليه يشفط ماية مقطرة لمدة دقيقتين … بعد كدة بتخلط الreagent ((1 مع الcoloring regent اللى هو (2) مع بعض بمكيات متساوية يعنى هتجط مثلا 1 مللي من RA على 1 مللي من RB عشان تعمل الworking solution يعنى المحلول اللى هتشتغل بيه بس عادة بتبقى 500 ميكرو من كل واحد عشان الكيوفيت بتشيل 1 مللي فقط……. بعد كدة بتجيب 3 انابيب واحدة للبلانك وواحدة للعينة وواحدة للمحلول القياسي وبتحط في كل انبوبة 1 مللي من الworking solution وتحطهم في التحضين عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لحد مايخدوا درجة الحرارة دي يعنى هتسيبهم لمدة دقيقتين او 5…. وبعد كدة انبوبة البلانك مبنضيفش فيها حاجة وانبوبة العينة بنضيف فيه 0.1 مللي يعنى 100 ميكرو من السيرم او البلازما وفي انبوبة الstandard او المحلول القياسي بنضيف برضو 0.1 مللي يعنى 100 ميكرو من الstandard وبتشغل التايمراو ساعة الإيقاف بمجرد ما تضيف العينة والstandard وتحطهم في التحضين او في الفوتوميتر علطول وتستنى 30 ثانية وتاخد قراءة وبعد كدة تستنى لحد 90 ثانية وتاخد قراءة تانية وبعد كدة بتحسب التركيز من المعادلة اللى هنشوفها في الحسابات.

In the case, if you use a semi-automated analyzer, you flush the suction system if it has a suction system or clean the cuvettes if it has not a suction system and then choose the programmed procedure for Creatinine test (you program it according to the reagent supplier). In this case, you can prepare the working solution reagent in a cuvette if it has not a suction system or tube if it has a suction system. Then place the cuvettes or tubes in the thermostable cell holder of the semi-automated analyzer or the water bath, then read the blank and then add the sample, start reading immediately after adding the sample, where the analyzer starts its own timer and takes the readings as scheduled then multiply the absorbance by the factor which we will be calculated at the calculation section. (if you don’t make the analyzer start reading after adding the sample immediately, you will get false low result) DON’T forget to flush again at the end of the tests if it has the suction system. IT IS EASIER THAN SPECTROPHOTOMETER

طبعا لو انت بتستخدم جهاز نصف اوتوماتك، بعد ما تشطف نظام الشفط او هتنضف الكيوفتات هتختار البرنامج بتاع تحليل الكرياتينين اللى انت برمجته أساسا بناءا على الكيتس اللى بتشتغل بيها لما جبت الجهاز جديد او لما غيرت الكيتس … بعد كدة لو الجهاز بتاعك سيمي اوتوميتيد ومن غير نظام شفط او suction يعنى يبقى هتحط الworkign reagent في الكيوفيت علطول ولو ليه نظام شفط يبقى هتحطه في انبوبة عادي وسواء كيوفيت او انابيب فهتحطهم في مكان التحضين في الجهاز او ممكن في الحمام المائي ولما تسيبها فترة تحضين عشان تاخد درجة حرارة التفاعل هتخلي الجهاز يقرا البلانك وبعد كدة هتحط العينة سواء سيرم او بلازما وبعد كدة بتخلي الجهاز يقرا الtest علطول بعد ما تحط العينة مباشرة عشان الجهاز بيشغل التايمر بتاعه وبيعد ال30 ثانية وال90 ثانية بتوعه وياخد القراءة الأولى والتانية ولو مدخلتش الtest في الجهاز علطول بعد ما حطيت العينة هيديك قراءة قليلة بالغلط … متنساش تشطف تاني بعد نهاية التحليل … طبعا ده اسهل بكتير.

Question

Is the technique used in this test a kinetic or colorimetric technique? Read it in the general concept page-2

هل الطريقة اللى بنشتغل بيها التحليل ده هي الكلوريمترك ولا الكاينتك؟ اقرا الاجابة في تحليل الكرياتينين الفكرة العامة صفحة 2 

5) Calculation:-

Creatinine concentration is calculated from the following equation.

Colorimetic-equation

ΔAsample = ΔA1 – ΔA2 and ΔAstandard = ΔA1 – ΔA2

It is better to see the how we get this equation in the calculation section in the general concept part click here to read it.

الافضل انك تشوف الحسابات في الفكرة العامة اضغط هنا

6) Reference range:-

Men 0.7 – 1.4 mg/dl = 61.8 – 123.7 μmol/l
Women 0.6 – 1.1 mg/dl = 53 – 97.2 μmol/LL

Females have lower creatinine level than men because they have lower muscle mass.

IV) Sources of errors:-

اقراها في تحليل الكرياتينين في المعمل – طريقة جافية – الفكرة العامة . اضغط هنا

V) Quality Control:-

اقراها في تحليل الكرياتينين في المعمل – طريقة جافية – الفكرة العامة . اضغط هنا

VI) Interpretation of test results:-

اقراها في تحليل الكرياتينين التعريف وتثقيف المريض . اضغط هنا

References:-

  • Spinreact.es
(0/5)0

Comments

Facebook Comments

Leave a Reply